Tris 醋酸盐配方
所需材料
1. **Tris 碱**:为主要缓冲成分,用于调节溶液的酸碱度。
2. **冰醋酸**:提供酸性环境,与 Tris 碱共同作用形成缓冲体系。
3. **乙二胺四乙酸二钠(EDTA)**:通常用于螯合金属离子,在本配方体系中有助于维持溶液的稳定性及某些特定反应环境。
操作步骤
1. **准备合适容器**:选取洁净且容量适配的玻璃烧杯或塑料容器,以用于后续试剂的混合。
2. **称取 Tris 碱**:依据所需配置溶液的浓度及体积,准确称取适量的 Tris 碱。例如,若要配置 1L 浓度为 0.5M 的 Tris - 醋酸盐缓冲液,需精确称取 60.57g Tris 碱(Tris 碱分子量约为 121.14g/mol)。将称取好的 Tris 碱小心倒入准备好的容器中。
3. **加入冰醋酸**:按照配方比例,缓慢向装有 Tris 碱的容器中加入冰醋酸。比如,对于上述 1L 0.5M 的 Tris - 醋酸盐缓冲液,若配方要求醋酸浓度为 0.1M,需量取 5.71mL 冰醋酸(冰醋酸密度约为 1.05g/mL,分子量为 60.05g/mol)。加入过程中注意边加边搅拌,促使其初步混合。
4. **添加 EDTA**:根据实际需求,称取适量的 EDTA 二钠并加入容器中。一般若要求最终 EDTA 浓度为 0.01M,配置 1L 溶液时,需称取 3.72g EDTA 二钠(EDTA 二钠分子量约为 372.24g/mol)。充分搅拌,使 EDTA 二钠完全溶解。
5. **定容**:向容器中缓缓加入去离子水,接近所需体积时,改用滴管小心添加,直至溶液体积准确达到目标值,如上述例子中的 1L。
6. **调节 pH 值**:使用精密 pH 计测量溶液 pH 值,并用稀醋酸或氢氧化钠溶液微调,直至达到该配方所需的特定 pH 值,常见如 pH 7.4 - 8.0 等,以满足不同实验或应用场景的需求。
7. **过滤除菌(若有需要)**:若该 Tris 醋酸盐溶液用于细胞培养、分子生物学实验等对无菌要求较高的场景,需通过 0.22μm 或 0.45μm 的滤膜进行过滤除菌,将滤液收集至无菌容器中备用。
注意事项
1. **试剂纯度**:确保使用的 Tris 碱、冰醋酸及 EDTA 二钠等试剂为分析纯或更高纯度级别,以避免杂质对实验结果产生干扰。
2. **操作安全**:冰醋酸具有腐蚀性和刺激性气味,操作时应佩戴防护手套、护目镜等防护装备,在通风良好的环境中进行。
3. **储存条件**:配置好的 Tris 醋酸盐溶液应密封保存于合适温度环境下,一般 4℃冷藏保存为宜,若长期保存且对微生物污染敏感,可适量添加抑菌剂。同时,定期检查溶液是否出现沉淀、变色等异常现象,若有则不宜再使用。