Tris 醋酸盐凝胶实验步骤
实验准备
1. **试剂与材料**：准备 Tris、冰醋酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、琼脂糖、去离子水、样品（待检测物质）、核酸分子量标准品、电泳缓冲液、溴化乙锭（EB）或其他核酸染料、移液器及枪头、制胶模具、梳子、电泳槽、电源等。
2. **溶液配制**：
- **50×TAE 缓冲液（Tris - 醋酸 - EDTA 缓冲液）**：称取 242g Tris 碱，加入 57.1ml 冰醋酸，100ml 0.5M EDTA（pH 8.0），用去离子水定容至 1L。使用时稀释 50 倍为 1×TAE 工作缓冲液。
- **琼脂糖凝胶**：根据实验需求，称取适量琼脂糖。例如，一般检测 DNA 常用 1% - 2%的琼脂糖凝胶，即若配制 100ml 凝胶，1%的凝胶称取 1g 琼脂糖，2%的凝胶称取 2g 琼脂糖。将琼脂糖加入适量 1×TAE 工作缓冲液中，加热搅拌至完全溶解。

制胶
1. **组装制胶模具**：将制胶模具洗净、晾干，放置在水平台上，插入梳子，确保梳子底部与模具底部保持适当距离（一般约 1 - 2mm）。
2. **倒入凝胶溶液**：待琼脂糖凝胶溶液冷却至约 50 - 60℃（手可耐受温度），加入适量核酸染料（如溴化乙锭，终浓度一般为 0.5μg/ml），轻轻混匀，避免产生气泡。然后缓慢倒入制胶模具中，使凝胶溶液均匀分布。
3. **凝胶凝固**：室温下放置 30 - 60 分钟，直至凝胶完全凝固。此时可见凝胶表面平整且有一定弹性，小心拔出梳子，避免破坏加样孔。

加样
1. **准备样品**：将待检测样品与适量上样缓冲液混合。上样缓冲液可提供颜色指示，便于观察样品在凝胶中的迁移情况，同时增加样品密度，使其能沉入加样孔。一般按样品与上样缓冲液 4:1 或 5:1 的比例混合。
2. **加样**：将凝固好的凝胶连同模具放入电泳槽中，加入 1×TAE 工作缓冲液，使缓冲液没过凝胶约 1 - 2mm。用移液器吸取适量混合好的样品，缓慢加入加样孔中。注意每个加样孔不要加样过满，避免样品溢出。同时，在相邻加样孔加入核酸分子量标准品，作为判断样品分子量大小的参照。

电泳
1. **连接电源**：将电泳槽的正负极与电源连接，注意样品孔端连接负极，另一端连接正极。
2. **设置参数**：根据凝胶浓度和样品特性设置合适的电压和电泳时间。一般情况下，1% - 2%的琼脂糖凝胶在 80 - 120V 电压下电泳 30 - 60 分钟。
3. **观察电泳过程**：电泳过程中可观察到核酸染料的迁移情况。当指示剂迁移至合适位置（如溴酚蓝迁移至凝胶底部约 1 - 2cm 处），停止电泳。

结果观察与分析
1. **观察**：电泳结束后，将凝胶从电泳槽中取出，放在凝胶成像仪或紫外透射仪下观察。在紫外光照射下，含有核酸的条带会发出荧光，可清晰看到样品条带和分子量标准品条带。
2. **分析**：根据分子量标准品条带的位置和已知分子量大小，估算样品条带的分子量。同时，观察样品条带的清晰度、亮度等，判断样品的质量和浓度。若条带模糊或有多条杂带，可能表示样品存在降解或杂质；若条带亮度异常，可推测样品浓度过高或过低。