醋酸钾 DNA 提取方案

材料准备
1. **试剂**：醋酸钾（Potassium Acetate）、冰醋酸（Glacial Acetic Acid）、蒸馏水（Distilled Water）、乙醇（Ethanol）、异丙醇（Isopropanol）、Tris - EDTA（TE）缓冲液等。
2. **器材**：离心机（Centrifuge）、移液器（Pipette）及配套枪头（Pipette Tips）、离心管（Centrifuge Tubes）、水浴锅（Water Bath）、电泳仪（Electrophoresis Apparatus）、凝胶成像系统（Gel Imaging System）等。

操作步骤
1. **细胞裂解**
- 将待提取 DNA 的样本（如细胞悬液）转移至合适的离心管中，以适当转速（如 5000 rpm）离心数分钟，弃去上清液，收集细胞沉淀。
- 向沉淀中加入适量裂解液（如含有蛋白酶 K 的裂解缓冲液），充分混匀，使细胞裂解。将离心管置于 37℃水浴锅中孵育一段时间（如 30 分钟），以促进蛋白质的消化。
2. **醋酸钾处理**
- 准备醋酸钾溶液，通常按照一定比例（如 5M 醋酸钾：冰醋酸：水 = 60：11.5：28.5 的比例配制）。
- 向裂解后的溶液中加入适量配制好的醋酸钾溶液，轻轻颠倒混匀，此时会观察到溶液中出现白色沉淀。这是因为醋酸钾与蛋白质、多糖等杂质结合形成沉淀，而 DNA 则留在上清液中。
- 将离心管在冰上放置数分钟（如 10 分钟），以促进沉淀的形成。然后以较高转速（如 12000 rpm）离心 10 - 15 分钟。
3. **上清液转移与核酸沉淀**
- 小心吸取离心后的上清液，转移至新的离心管中，注意不要吸取到沉淀。
- 向上清液中加入适量的异丙醇（一般为上清液体积的 0.6 - 1 倍），轻轻颠倒混匀，此时可见白色丝状的 DNA 析出。
- 将离心管在室温下放置数分钟（如 5 - 10 分钟），然后以 12000 rpm 离心 5 - 10 分钟，使 DNA 沉淀在管底。
4. **洗涤与干燥**
- 弃去上清液，向含有 DNA 沉淀的离心管中加入适量 70%乙醇，轻轻洗涤 DNA 沉淀，以去除残留的杂质和盐分。
- 再次以 12000 rpm 离心 2 - 3 分钟，弃去乙醇，将离心管倒扣在干净的吸水纸上，让残留的乙醇自然挥发，使 DNA 沉淀干燥。注意不要过度干燥，以免 DNA 难以溶解。
5. **DNA 溶解**
- 待 DNA 沉淀干燥后，向离心管中加入适量的 TE 缓冲液（或蒸馏水），轻轻吹打或振荡，使 DNA 充分溶解。可将离心管置于 37℃水浴锅中孵育数分钟，以加速溶解。
6. **质量检测**
- 取适量溶解后的 DNA 溶液，通过琼脂糖凝胶电泳（Agarose Gel Electrophoresis）进行检测。配制合适浓度的琼脂糖凝胶（如 1% - 2%），加入核酸染料（如 EB 或 SYBR Green），将 DNA 样品与上样缓冲液混合后上样。
- 在合适的电压下进行电泳，电泳结束后，通过凝胶成像系统观察 DNA 的条带情况，判断 DNA 的完整性和纯度。同时，可通过紫外分光光度计测定 DNA 溶液在 260 nm 和 280 nm 处的吸光度，计算 A260/A280 的比值，评估 DNA 的纯度，理想的比值应在 1.8 - 2.0 之间。

注意事项
1. 操作过程中应尽量轻柔，避免剧烈振荡，防止 DNA 断裂。
2. 所有试剂应保持纯净，避免污染，移液器枪头应每次更换，防止交叉污染。
3. 乙醇洗涤后干燥 DNA 沉淀时，注意控制干燥时间，避免 DNA 过于干燥而难以溶解。
4. 在进行电泳检测时，注意设置合适的电压和时间，以获得清晰的 DNA 条带。