醋酸纤维素电泳操作流程
材料准备
1. 醋酸纤维素薄膜:选用合适规格与孔径的醋酸纤维素薄膜,以满足样本分离需求。
2. 缓冲液:依据样本特性及分离目的,精确配置特定pH值与离子强度的缓冲液,如巴比妥缓冲液等。
3. 样本:妥善处理待分析样本,确保其浓度与纯度适宜电泳分离,比如血清样本需离心去除杂质。
4. 电泳仪与电泳槽:检查仪器性能,确保能稳定提供所需电压与电流,且电泳槽清洁无杂质。
5. 染色液与洗脱液:准备合适的染色液,如氨基黑10B染色液,以及对应的洗脱液。
操作步骤
1. **薄膜准备**:将醋酸纤维素薄膜浸入缓冲液中充分浸泡,使其完全湿润,随后取出,用滤纸轻压以吸去多余缓冲液。
2. **点样**:使用微量移液器或点样器,准确吸取适量样本,均匀点于薄膜的点样线上,注意点样量不可过多或过少,以免影响分离效果。
3. **电泳**:将点样后的薄膜平整放入电泳槽支架上,点样端置于负极,盖好电泳槽盖。接通电源,依据样本特性与薄膜规格,设定合适的电压与电流,通常电压为100 - 200V,电泳时间约为30 - 60分钟。
4. **染色**:电泳结束后,小心取出薄膜,放入染色液中浸泡数分钟,使蛋白质等样本充分染色。
5. **洗脱**:将染色后的薄膜移至洗脱液中,轻轻振荡,洗去多余染色液,直至背景清晰,条带分明。
6. **结果观察与分析**:通过肉眼或借助扫描仪等设备,观察分析薄膜上的条带位置、数量与颜色深浅,以判断样本成分与含量。
注意事项
1. 操作过程需保持薄膜湿润,避免干燥导致条带变形。
2. 点样应迅速且均匀,防止样本扩散。
3. 电泳过程中密切关注电压、电流变化,确保电泳条件稳定。
4. 染色与洗脱时间需严格控制,以免影响结果清晰度与准确性。